Extracción de ARN de la muestra

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El RNA total se extrae de la muestra usando el Reactivo de TRIzol.




La extracción de RNA es una etapa previa para realizar análisis moleculares diversos que nos permiten identificar un transcrito (RNA) de interés y sus niveles de expresión (cantidad de transcrito). La extracción de RNA total empleando el reactivo TRIzol se fundamenta en el uso de una solución monofásica de fenol e isotiocianato de guanidina que permite la obtención de moléculas de RNA de tamaño variado (pequeños hasta grandes). 

Purificación del ARN


La extracción de RNA total empleando el reactivo TRIzol se fundamenta en el uso de una solución monofásica de fenol e isotiocianato de guanidina que permite la obtención de moléculas de RNA de tamaño variado (pequeños hasta grandes). El reactivo de TRIzol mantiene la integridad del RNA al inhibir eficientemente la actividad RNAasa al momento de romper y homogenizar las células/tejidos. Después de homogenizar la muestra, se añade cloroformo, lo que permite la separación de una fase acuosa superior (conteniendo el RNA), una fase intermedia, y una fase inferior orgánica de color roja (conteniendo DNA y proteínas). El RNA se precipita de la fase acuosa empleando isopropanol. Este método permite la obtención de una buena cantidad de RNA total, por ejemplo, de 8 a 15 µg (1 x 106 células epiteliales), 73 µg (de material genetico del virus). 

Acontinuación se muestra un video que resume el procedimiento para la obtención del RNA total con el reactivo de TRIzol. 


 

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