Entradas

Mostrando las entradas de octubre, 2020

Sintesis de ADNc y qPCR

Imagen
Este extracto de ARN consiste en una mezcla del material genético de la persona y, de estar presente, del ARN del coronavirus. Se procede a la transcripción inversa del ARNm para convertirlo en ADN monocatenario mediante una enzima específica llamada t ranscriptasa inversa (M-MLV) . Para llevar acabo este proceso, se añaden pequeños fragmentos adicionales de ADN que complementan determinadas partes del ARN vírico transcrito. Esos fragmentos llamados oligos dT se adhieren a partes específicas del ARN vírico (colas de adenina o también llamadas colas poliA) que sirven para crear la cadena de ADNc ya que la enzima   M-MLV reconoce el sitio de union donde empezará la síntesis de dirección 3' a 5' .

Extracción de ARN de la muestra

Imagen
El RNA total se extrae de la muestra  usando el Reactivo de TRIzol. La extracción de RNA es una etapa previa para realizar análisis moleculares diversos que nos permiten identificar un transcrito (RNA) de interés y sus niveles de expresión  (cantidad de transcrito). La extracción de RNA total empleando el reactivo TRIzol se fundamenta en el uso de una solución monofásica de fenol e isotiocianato de guanidina que permite la obtención de moléculas de RNA de tamaño variado (pequeños hasta grandes).